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构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(二)
实验室內,还会有以下常用的基本设备。
I.仪器:
1)显微镜:倒置显微镜是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一,便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
2)培养箱:体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,大多数情况下,适温度是 37'℃,温差变化一般不应*过±0.5'℃,细胞在温度升高 2^C时,持续数小时即不能耐受,40°℃ 以上捋很。因此需要有能控制温度的培养箱,如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO₂培养箱。
3)干燥箱:川于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,电热干燥箱升温较高,一般需达到 160°c 以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至 10(TC时,停止鼓风,应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后,不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏,应等候溫度自然下降至 100°c以下方可开门。
4)水纯化装置:细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。水纯化时可采用离子交换装賈或蒸馏器。离子交换纯水尚不能有效去除有机物,因此用水时尚需冉次蒸馏。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水:即使是用于玻璃器皿的冲洗,也应使用二次以上蒸馏水。
5)冰箱:细胞培养室必须配备。
普通冰箱或冷藏杞
储存培养液、生理盐水、Hank’s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本
低温冰箱(-20 °c)、温冰箱
用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂,如酶、血清等。
细胞培养室的冰箱应属,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。
6)细胞冷冻储存器:储存器常用的是液氮界器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用方便及液氮挥发量(经济)三种因素。液氮界器的大小可自25L~500L,可以储存1m1的安甑250~15000个左右液氮温度可低达-196℃,使用时应防止冻伤。由于液氮不断挥发,应注意观察存留液氮情況,及时定期补充液氮,避免挥发过多而致细胞受损。
7)离心机:进行细胞培养时,常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作,通常需要使用离心机。
一般可常规配置 4000rpni 的国产台式离心机,例如细胞沉降,使用 80~100g的离心机即可,离心力过大有时可能引起细胞的损伤。
另外,可根据需要添置其他类型如大容显或可调节温度的离心机等。
若需用途,例如某些细胞的分离制备需梯度离心,则需另行配置实验所需的具备其他功能的离心机。
8)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。
分析大下的感;W:为 0.1mg、0.01mg和10.001mg。根据称取物质的;W:和称精度的要求,选择适宜级别的天平。要求精密称定时,当取样量大于 100mg 选用感量为 0. 1mg 天平,在 100— 10mg选用感量为 0.01mg 天平,小于10mg选用感量为 0.001mg 天平。
9)消毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。
10)滤器:目前细胞培养工作中采用的培养用液,包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在商温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多朵用滤过沙毒以除去细胞。